Plasmide CRISPR d'Activation (m) bradykinin B2 R: sc-419318-ACT

Le gène murin **Bdkrb2** code le récepteur B2 de la bradykinine (bradykinin B2 R), un RCPG exprimé de manière constitutive qui médie les réponses aux kinines dans les tissus vasculaires et inflammatoires. Après liaison du ligand, il se couple principalement à Gαq/11 et Gαi/o pour activer la PLCβ, augmenter le Ca2+ intracellulaire, stimuler la PKC et engager les voies de signalisation de l’oxyde nitrique et des prostaglandines, qui régulent la vasodilatation, la perméabilité vasculaire et le tonus du muscle lisse. La signalisation dépendante de Bdkrb2 recoupe des programmes liés aux voies MAPK et NF-κB qui modulent le recrutement des leucocytes, la formation d’œdème et la sensibilisation à la douleur. Une activité dysrégulée du récepteur B2 est fréquemment étudiée dans des modèles d’homéostasie cardiovasculaire, d’inflammation neurogène et de physiologie rénale, où elle peut influencer le remodelage tissulaire et la charge inflammatoire.

bradykinin B2 R Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Bdkrb2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

bradykinin B2 R Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Bdkrb2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Bdkrb2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de bradykinin B2 R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Bdkrb2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de bradykinin B2 R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie bradykinin B2 R dans les cellules tumorales présentant une expression de Bdkrb2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.