bradykinin B1 R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401169-ACT

BDKRB1 kodiert den Bradykinin‑B1‑Rezeptor (Bradykinin B1 R), einen induzierbaren G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der durch inflammatorische Zytokine und Gewebeschädigung hochreguliert wird. Nach Bindung von des‑Arg‑Bradykinin‑Peptiden signalisiert der Bradykinin B1 R über Gαq/PLCβ, wodurch intrazelluläres Ca²⁺ ansteigt und PKC aktiviert wird; außerdem kann er MAPK‑ und NF‑κB‑Signalwege einbinden, um die Chemokinproduktion, die Gefäßpermeabilität und das Leukozyten‑Trafficking zu modulieren. Die Expression ist in homöostatischen Geweben typischerweise gering, steigt jedoch in aktiviertem Endothel, glatter Muskulatur und Immunzellen an und verknüpft BDKRB1 damit mit inflammatorischen und nozizeptiven Programmen. Eine fehlregulierte BDKRB1‑Signalgebung wurde mit chronischer Entzündung, der Biologie neuropathischer Schmerzen, vaskulärer Dysfunktion sowie Gewebeumbau in Zusammenhängen in Verbindung gebracht, die für die kardiometabolische und neuroinflammatorische Forschung relevant sind.

bradykinin B1 R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BDKRB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

bradykinin B1 R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BDKRB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BDKRB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen bradykinin B1 R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BDKRB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von bradykinin B1 R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des bradykinin B1 R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BDKRB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.