Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BLM Double Nickase Plasmid (h): sc-400896-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BLM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BLM Double-Nickase-Plasmid (h) und BLM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BLM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BLM: sc-365753
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BLM Double Nickase Plasmid (h) | sc-400896-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BLM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400896-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BLM kodiert eine DNA-Helikase der RecQ-Familie, die die Genomstabilität erhält, indem sie aberrante sekundäre DNA-Strukturen entwindet und bei der homologen Rekombination die Endresektion von DNA koordiniert. BLM wirkt zusammen mit dem BTRR-Komplex (BLM–TOP3A–RMI1/2), um doppelte Holliday-Junctions aufzulösen, wodurch Crossover-Ereignisse begrenzt und eine fehlerarme Chromosomentrennung gefördert werden. Es ist in Signalwege der S-Phasen-Checkpoint-Kontrolle, des Neustarts gestoppter Replikationsgabeln und der Telomererhaltung eingebunden, die Chromosomenbrüche und Schwesterchromatidaustausch begrenzen. Ein Verlust oder eine Funktionsstörung von BLM beeinträchtigt die Replikationsstressantwort und ist in experimentellen Modellen mit Bloom-Syndrom-assoziierten Phänotypen genomischer Instabilität sowie einer erhöhten Krebsprädisposition verknüpft.
BLM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BLM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BLM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BLM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BLM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.