BID CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400510-ACT

Das humane **BID** kodiert ein BH3-only-Protein der BCL-2-Familie, das die extrinsische Todesrezeptor-Signalgebung mit dem intrinsischen, mitochondrialen Apoptoseweg verknüpft. Nach der Spaltung durch Caspase-8 zu verkürztem BID (tBID) fördert es die BAX/BAK-abhängige Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran, die Freisetzung von Cytochrom c und die nachgeschaltete Caspase-Aktivierung und integriert damit apoptotische Signale mit zellulären Stressantworten. Die BID-Aktivität überschneidet sich mit der p53-Signalgebung, NF-κB-regulierten Überlebenswegen und der mitochondrialen Dynamik, die Zellschicksalsentscheidungen prägt. Eine dysregulierte BID-Expression oder -Prozessierung wurde mit veränderten Apoptoseschwellen in der Krebsbiologie, der Immunhomöostase und in Modellen von Gewebeschädigung in Verbindung gebracht, was BID zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Regulation des Zelltods macht.

BID Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BID-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BID Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BID-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BID-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BID-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BID-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BID-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BID-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BID-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.