Plasmide CRISPR d'Activation (h) beta Arrestin 1: sc-400642-ACT

ARRB1 code la bêta‑arrestine 1, un adaptateur multifonctionnel qui régule la désensibilisation des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG/GPCR), leur internalisation et leur trafic après stimulation par un agoniste. Au-delà de l’arrêt de la signalisation via les protéines G, la bêta‑arrestine 1 sert de plateforme d’assemblage à des complexes de signalisation qui modulent les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et NF‑κB, façonnant des réponses transcriptionnelles dépendantes du contexte ainsi que la dynamique du cytosquelette. Par ces fonctions, ARRB1 influence notamment la chimiotaxie, l’endocytose et l’intégration des signaux en aval de récepteurs variés. Une dérégulation de la signalisation médiée par les arrestines a été associée à des états de signalisation proliférative et inflammatoire altérés, impliqués dans la biologie des cancers, la régulation cardiométabolique et des circuits RCPG pertinents en neuropsychiatrie.

beta Arrestin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARRB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

beta Arrestin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARRB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARRB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de beta Arrestin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARRB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de beta Arrestin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie beta Arrestin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ARRB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.