beta Arrestin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400642-ACT

ARRB1 codifica a beta-arrestina 1, um adaptador multifuncional que regula a dessensibilização de receptores acoplados à proteína G (GPCR), a internalização do receptor e o tráfego intracelular após a estimulação por agonistas. Além de encerrar a sinalização mediada por proteína G, a beta-arrestina 1 atua como plataforma (scaffold) para complexos de sinalização que modulam as vias MAPK/ERK, PI3K–AKT e NF-κB, moldando respostas transcricionais dependentes do contexto e a dinâmica do citoesqueleto. Por meio dessas funções, o ARRB1 influencia processos como quimiotaxia, endocitose e integração de sinais a jusante de diversos receptores. A sinalização mediada por arrestinas, quando desregulada, tem sido associada a estados alterados de sinalização proliferativa e inflamatória implicados na biologia do câncer, na regulação cardiometabólica e em circuitos de GPCR relevantes para neuropsiquiatria.

beta Arrestin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARRB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

beta Arrestin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARRB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARRB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de beta Arrestin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARRB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de beta Arrestin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via beta Arrestin 1 em células tumorais com expressão de ARRB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.