Partículas Lentivirales de Activación (h) BECN1/Beclin-1: sc-400139-LAC

BECN1 codifica Beclin-1, un andamiaje central de los complejos de fosfatidilinositol 3-quinasa de clase III (PI3KC3/VPS34) que inician la nucleación del autofagosoma y coordinan el flujo autofágico. Mediante interacciones con ATG14, UVRAG, AMBRA1 y proteínas de la familia BCL2, Beclin-1 integra la detección de nutrientes y las señales de estrés para regular la autofagia, el tráfico endolisosomal y la dinámica de membranas. La autofagia dependiente de BECN1 contribuye al control de calidad mitocondrial, la proteostasis y las respuestas inmunitarias innatas, vinculándola con vías que gobiernan la supervivencia celular y la inflamación. La desregulación de BECN1 y de los complejos de Beclin-1 se asocia con una autofagia alterada en la biología del cáncer, la neurodegeneración, la infección y otros trastornos en los que la función lisosomal y la adaptación al estrés están perturbadas.

Las partículas de activación lentiviral BECN1/Beclin-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BECN1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BECN1/Beclin-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BECN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BECN1/Beclin-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BECN1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.