BDP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422508

Übersicht

Ptpn18 kodiert eine Protein-Tyrosinphosphatase, die an der Regulation der Signalübertragung von Rezeptor-Tyrosinkinasen und nachgeschalteter, phosphorylierungsabhängiger Signalwege beteiligt ist, welche Zellwachstum, Adhäsion und Motilität prägen. In Mauszellen wurde PTPN18 mit der Modulation der EGFR/ErbB-Familien-Signalgebung sowie mit Prozessen des Proteintransports in Verbindung gebracht, die die Signaldauer und die räumliche Organisation von Signalen beeinflussen. Durch die Dephosphorylierung spezifischer Substrate kann PTPN18 MAPK- und PI3K-assoziierte Outputs beeinflussen und so Signale integrieren, die sich auf die Zytoskelettdynamik und zelluläre Stressantworten auswirken. Eine fehlregulierte Phosphataseaktivität und eine veränderte RTK-Signalübertragung werden häufig mit onkogenen Signalprogrammen und inflammatorischen Phänotypen assoziiert, wodurch Ptpn18 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in krankheitsrelevanten Modellen darstellt.

Das BDP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ptpn18-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ptpn18-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ptpn18 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BDP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ptpn18-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BDP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ptpn18-Exone abzielen, die für die BDP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ptpn18-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BDP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom BDP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ptpn18-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BDP1 HDR-Plasmid (m) und BDP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ptpn18-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ptpn18-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.