BBS4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403421

Übersicht

BBS4 kodiert eine zentrale Komponente des BBSom-Komplexes, der mit der intraflagellären Transportmaschinerie zusammenwirkt, um den Aufbau der primären Zilie und den Transport von Membranproteinen in der Zilie zu regulieren. Über seine Rolle für die Signalübertragungskompetenz der Zilie beeinflusst BBS4 Signalwege wie Hedgehog und weitere rezeptorvermittelte Programme, die von einer intakten Ziliogenese und einer selektiven Frachtzustellung abhängen. Eine Störung von BBS4 beeinträchtigt die Funktion von Centrosom/Basalkörper, kompromittiert die Zilienstruktur und verändert zelluläre Reaktionen auf extrazelluläre Signale. Varianten in BBS4 sind mit dem Bardet–Biedl-Syndrom und verwandten Ziliopathien assoziiert, wodurch das Gen für die Untersuchung von Mechanismen relevant ist, die Ziliendysfunktion mit Entwicklungs- und Stoffwechselphänotypen verknüpfen.

Das BBS4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BBS4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BBS4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BBS4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BBS4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BBS4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BBS4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BBS4-Exone abzielen, die für die BBS4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BBS4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BBS4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BBS4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BBS4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BBS4 HDR-Plasmid (h) und BBS4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BBS4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BBS4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.