BAZ2B CRISPR Activation Plasmid (m): sc-436575-ACT

Das Mausgen **Baz2b** kodiert **BAZ2B**, einen bromodomänenhaltigen Chromatinregulator, der Acetyl-Lysin-Markierungen auf Histonen erkennt und die Koordination von Nukleosomen-Remodeling sowie der transkriptionellen Kontrolle unterstützt. Über seine Rolle bei der Chromatinzugänglichkeit und der epigenetischen Regulation kann BAZ2B Entwicklungs-Genprogramme, die Aufrechterhaltung der Zellidentität und stimulusabhängige transkriptionelle Netzwerke beeinflussen. Veränderte bromodomänenvermittelte Signalgebung und eine dysregulierte Chromatin-Remodellierung werden allgemein mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für Neuroentwicklung, metabolische Homöostase und onkogene Transkriptionszustände relevant sind, wodurch **Baz2b** einen nützlichen Knotenpunkt zur Untersuchung von Interaktionen epigenetischer Signalwege darstellt. Die experimentelle Modulation der **Baz2b**-Expression unterstützt Studien zur Promotor-/Enhancer-Funktion, zur chromatinabhängigen Transkription und zur Umverdrahtung von Gennetzwerken in Säugersystemen.

BAZ2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Baz2b-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BAZ2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Baz2b-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Baz2b-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BAZ2B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Baz2b-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BAZ2B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BAZ2B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Baz2b-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.