Plasmide Double Nickase (m) BACE: sc-423847-NIC

Le gène murin **Bace1** code la β‑site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1 (**BACE**), une protéase aspartique qui initie le traitement amyloïdogène d’APP en générant le fragment **C99**, ensuite clivé par la **γ‑sécrétase**. L’activité de BACE s’articule avec le trafic endosomal et la protéolyse intramembranaire régulée, et contribue à la protéostasie ainsi qu’au renouvellement des protéines membranaires dans les neurones et d’autres types cellulaires. Des altérations de l’expression ou de l’activité de **Bace1** ont été associées à la production d’amyloïde‑β et à des dysfonctionnements synaptiques, ce qui en fait une cible largement utilisée pour des études mécanistiques des voies pertinentes pour la neurodégénérescence. La modulation expérimentale de **Bace1** permet d’étudier la dynamique du traitement d’APP, le fonctionnement endolysosomal et les changements de signalisation en aval dans des modèles cellulaires et murins.

BACE Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Bace1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Bace1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Bace1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Bace1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.