B7-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401971-NIC

CD80 (B7-1) è un ligando costimolatorio inducibile della superfamiglia delle immunoglobuline, espresso principalmente sulle cellule presentanti l’antigene, che si lega a CD28 e CTLA-4 per modulare l’attivazione, la proliferazione e la tolleranza delle cellule T. Integrandosi con la segnalazione del TCR, CD80 influenza i programmi a valle di PI3K–AKT, NF-κB e della trascrizione di citochine che plasmano le risposte immunitarie adattative. Un’espressione deregolata di CD80 è implicata nell’alterazione dell’equilibrio dei checkpoint immunitari e in un’anomala presentazione dell’antigene osservate in diversi contesti infiammatori e autoimmuni, ed è frequentemente studiata nell’ambito delle interazioni tumore–sistema immunitario. In quanto marcatore di superficie con una biologia recettoriale ben definita, CD80 è comunemente utilizzato per analizzare la maturazione delle APC, le soglie di costimolazione e la formazione della sinapsi immunologica in modelli cellulari umani.

B7-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD80 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD80. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD80. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD80 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.