Plasmide Double Nickase (h) AVP Receptor V1a: sc-401691-NIC

AVPR1A code le récepteur humain 1A de l’arginine-vasopressine (récepteur AVP V1a), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase Cβ, augmentant le Ca²⁺ intracellulaire et le diacylglycérol afin d’induire la signalisation via la protéine kinase C (PKC). Ce récepteur module la contraction du muscle lisse vasculaire, la fonction plaquettaire, la glycogénolyse hépatique et la signalisation neuroendocrinienne, intégrant les réponses à la vasopressine dans les tissus périphériques et le système nerveux central. Les voies dépendantes d’AVPR1A recoupent les programmes MAPK/ERK et de gènes de réponse immédiate, reliant l’activation du récepteur à des réponses transcriptionnelles et cellulaires dépendantes du contexte. Une signalisation AVPR1A dérégulée ou des variations génétiques ont été étudiées dans des phénotypes cardiovasculaires et métaboliques ainsi que dans des traits neurocomportementaux, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques des voies sensibles à la vasopressine.

AVP Receptor V1a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AVPR1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AVPR1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AVPR1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AVPR1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.