AVP Receptor V1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401691

Übersicht

AVPR1A kodiert den Arginin-Vasopressin-Rezeptor V1a, einen rhodopsinartigen GPCR, der vor allem an Gq/11 koppelt und dadurch die Phospholipase C aktiviert. Dabei entstehen IP3/DAG-Signale, die den intrazellulären Ca²⁺-Spiegel erhöhen und PKC-abhängige Transkriptionsprogramme stimulieren. Die V1a-Rezeptor-Signalgebung reguliert die Kontraktion glatter Gefäßmuskulatur, die Reaktivität von Thrombozyten, die hepatische Glykogenolyse sowie neuromodulatorische Schaltkreise, die an sozialem Verhalten und stressbezogenen Reaktionen beteiligt sind. In Zellen überschneidet sich die AVPR1A-Aktivität mit der MAPK/ERK-Signalübertragung, der calciumabhängigen Genregulation und dem Zytoskelett-Remodeling, die Kontraktilität und Migration beeinflussen. Eine dysregulierte Vasopressin–V1a-Signalgebung wurde im Zusammenhang mit kardiovaskulären und metabolischen Phänotypen sowie neuropsychiatrischen Merkmalsassoziationen untersucht und stützt mechanistische Studien zur Rezeptorfunktion in unterschiedlichen Gewebekontexten.

Das AVP Receptor V1a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AVPR1A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AVPR1A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AVPR1A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AVP Receptor V1a-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AVPR1A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AVP Receptor V1a-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AVPR1A-Exone abzielen, die für die AVP Receptor V1a-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AVPR1A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AVP Receptor V1a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AVP Receptor V1a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AVPR1A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AVP Receptor V1a HDR-Plasmid (h) und AVP Receptor V1a HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AVPR1A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AVPR1A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.