Plasmide CRISPR d'Activation (h) AVP Receptor V1a: sc-401691-ACT

AVPR1A code le récepteur humain 1A de l’arginine-vasopressine (V1a), un RCPG à sept domaines transmembranaires qui se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase C, la signalisation par les inositol-phosphates, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire et des programmes transcriptionnels dépendants de la PKC. La signalisation via V1a influence le tonus du muscle lisse vasculaire, les réponses plaquettaires et endothéliales, ainsi que des circuits neuroendocriniens qui régulent la réactivité au stress et le comportement social, en s’intégrant aux voies MAPK/ERK et à d’autres cascades en aval. Des altérations de l’expression ou de la signalisation d’AVPR1A ont été étudiées en recherche cardiovasculaire et neuropsychiatrique, notamment pour la régulation de la pression artérielle, des phénotypes vasoconstricteurs et des études d’association avec des traits comportementaux. Ces liens font d’AVPR1A une cible utile pour disséquer la transduction du signal des RCPG et la biologie de l’axe vasopressinergique dans des modèles cellulaires.

AVP Receptor V1a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AVPR1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AVP Receptor V1a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AVPR1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AVPR1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AVP Receptor V1a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AVPR1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AVP Receptor V1a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AVP Receptor V1a dans les cellules tumorales présentant une expression de AVPR1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.