AVP Receptor V1a CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401691-ACT

AVPR1A kodiert den humanen Arginin-Vasopressin-Rezeptor 1A (V1a), einen siebenfach transmembranären GPCR, der überwiegend an Gq/11 koppelt und dadurch die Phospholipase C, die Inositolphosphat-Signalübertragung, die intrazelluläre Ca²⁺-Mobilisierung sowie PKC-abhängige Transkriptionsprogramme aktiviert. Die V1a-Signalgebung beeinflusst den Tonus der vaskulären glatten Muskulatur, Thrombozyten- und Endothelreaktionen sowie neuroendokrine Schaltkreise, die Stressreaktivität und Sozialverhalten regulieren, und integriert sich dabei in MAPK/ERK- und weitere nachgeschaltete Signalwege. Veränderte AVPR1A-Expression oder -Signalübertragung wurde in kardiovaskulären und neuropsychiatrischen Forschungskontexten untersucht, unter anderem im Zusammenhang mit Blutdruckregulation, vasokonstriktiven Phänotypen und Assoziationsstudien zu Verhaltensmerkmalen. Diese Zusammenhänge machen AVPR1A zu einem nützlichen Ziel, um GPCR-Signaltransduktion und die Biologie der Vasopressin-Achse in zellbasierten Modellen zu untersuchen.

AVP Receptor V1a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AVPR1A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

AVP Receptor V1a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AVPR1A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AVPR1A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen AVP Receptor V1a-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AVPR1A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von AVP Receptor V1a-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des AVP Receptor V1a-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AVPR1A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.