ATRX Double Nickase Plasmid (h): sc-400454-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ATRX Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ATRX Double-Nickase-Plasmid (h) und ATRX Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATRX abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ATRX: sc-55584
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATRX Double Nickase Plasmid (h) | sc-400454-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATRX Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400454-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATRX kodiert einen dem SWI/SNF-Komplex ähnlichen, ATP-abhängigen Chromatin-Remodeler, der mit DAXX zusammenwirkt, um die Histonvariante H3.3 in repetitiven Genomregionen abzulagern, darunter Telomere und perizentromeres Heterochromatin. Durch die Regulation der Nukleosomenpositionierung, des Zeitpunkts der DNA-Replikation und transkriptioneller Programme trägt ATRX zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität und einer korrekten Chromatinarchitektur bei. Eine Störung der ATRX-Funktion wird mit veränderten epigenetischen Zuständen und Telomer-Erhaltungswegen in Verbindung gebracht und wird häufig in Kontexten wie neuroentwicklungsbedingten Erkrankungen und Krebserkrankungen untersucht, die eine alternative Telomerverlängerung (ALT) aufweisen. Als nukleärer Chromatinfaktor wird ATRX häufig im Hinblick auf seine Rollen in DNA-Schadensantworten, der Toleranz gegenüber Replikationsstress und der Kontrolle der Expression repetitiver Elemente erforscht.
ATRX Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATRX-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATRX abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATRX-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATRX-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.