Particules Lentivirales d'Activation (m) ATR: sc-434115-LAC

Le gène murin *Atr* code ATR, une kinase sérine/thréonine de type PI3K qui orchestre la réponse aux dommages de l’ADN en cas de stress de réplication et de présence d’ADN simple brin. ATR est activée via un recrutement dépendant d’ATRIP et de TOPBP1 et transmet principalement le signal par CHK1 afin de stabiliser les fourches de réplication bloquées, de réguler l’initiation aux origines de réplication et de coordonner le contrôle des points de contrôle des phases S et G2/M. Cette voie interagit avec les composants de l’anémie de Fanconi, les facteurs de recombinaison homologue et les régulateurs du cycle cellulaire pour préserver l’intégrité du génome. La perturbation ou la dérégulation de la signalisation ATR est largement utilisée pour modéliser les mécanismes à l’origine de l’instabilité génomique, des lésions de l’ADN associées à la réplication et des programmes prolifératifs d’adaptation au stress pertinents pour la biologie du cancer et certains phénotypes du développement dans des systèmes murins.

Les particules d'activation lentivirales ATR (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Atr dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ATR (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Atr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ATR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Atr ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.