Plásmido CRISPR de Activación (h) ATPIF1: sc-403038-ACT

ATPIF1 (factor inhibidor 1 de la ATPasa) codifica una proteína mitocondrial que se une a la ATP sintasa F1F0 para limitar la hidrólisis de ATP cuando colapsa el potencial de membrana mitocondrial, lo que ayuda a preservar el ATP celular durante el estrés energético. Al modular la eficiencia de la fosforilación oxidativa y el estado de acoplamiento, ATPIF1 influye en la bioenergética mitocondrial, el equilibrio de especies reactivas de oxígeno y la reprogramación metabólica entre respiración y glucólisis. Su actividad se relaciona con el control de calidad mitocondrial y con vías de señalización adaptativas al estrés que determinan la supervivencia y la proliferación celulares bajo hipoxia o limitación de nutrientes. La desregulación de la expresión de ATPIF1 se ha asociado con una función mitocondrial alterada en el metabolismo del cáncer y con defectos bioenergéticos implicados en modelos de enfermedades cardiometabólicas y neurodegenerativas.

ATPIF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATPIF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATPIF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATPIF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATPIF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATPIF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATPIF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATPIF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATPIF1 en células tumorales con expresión de ATPIF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.