Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP6F (h): sc-406611

Présentation

ATP6V0B code ATP6F, une sous-unité accessoire de l’ATPase vacuolaire à protons (V‑ATPase) qui soutient la translocation de protons dépendante de l’ATP afin d’acidifier les endosomes, les lysosomes et les vésicules de sécrétion. L’activité de la V‑ATPase est au cœur du trafic endocytaire, du recyclage des récepteurs, de la fonction autophagie–lysosome et du traitement des macromolécules dépendant du pH, influençant ainsi la détection des nutriments et les réponses cellulaires au stress. La perturbation des sous-unités de la V‑ATPase peut déstabiliser l’homéostasie des organites et a été associée à des dynamiques vésiculaires altérées et à des phénotypes liés à la maladie dans des contextes tels que la neurodégénérescence, la biologie des infections et le métabolisme des cellules cancéreuses, où l’acidification des compartiments est fréquemment remodelée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP6F (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATP6V0B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATP6V0B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATP6V0B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATP6F.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATP6V0B pour l'étude de la signalisation de ATP6F, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATP6V0B essentiels à la fonction de ATP6F
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATP6V0B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATP6F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ATP6F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATP6V0B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATP6F plasmide HDR (h) et le ATP6F (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATP6V0B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATP6V0B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.