Plasmide Double Nickase (h) ATP6AP1: sc-404162-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ATP6AP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATP6AP1 Double Nickase (h) et le plasmide ATP6AP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATP6AP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATP6AP1 Antibody (E-10): sc-515607
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ATP6AP1 | sc-404162-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ATP6AP1 | sc-404162-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6AP1 code une composante accessoire de la machinerie de la H\+-ATPase vacuolaire (V-ATPase), qui soutient l’acidification des organites au sein du système endolysosomal. En modulant le pH luminal de compartiments tels que les lysosomes et l’appareil de Golgi, ATP6AP1 influence le trafic des protéines, le recyclage des récepteurs et le renouvellement des macromolécules dépendant des lysosomes, façonnant ainsi la protéostase et la signalisation cellulaires. Le bon fonctionnement de la V-ATPase s’articule avec les voies autophagie–lysosome et les processus sécrétoires dépendants de la glycosylation, essentiels au maintien de l’homéostasie en conditions métaboliques et de stress. La dérégulation de l’acidification et du trafic associés à ATP6AP1 a été liée à des troubles affectant le métabolisme cellulaire, le transport membranaire et la physiologie des organes, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du fonctionnement des endomembranes.
ATP6AP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP6AP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP6AP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP6AP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP6AP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.