Plasmide Double Nickase (m) Atm: sc-419229-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Atm correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Atm Double Nickase (m) et le plasmide Atm Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Atm. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p-Atm Antibody (10H11.E12): sc-47739
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Atm | sc-419229-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Atm | sc-419229-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Atm code une protéine kinase sérine/thréonine qui agit comme capteur et transducteur central de la signalisation déclenchée par les cassures double brin de l’ADN. En réponse à un stress génotoxique, ATM s’active et phosphoryle des substrats clés, notamment H2AX, CHEK2, TP53 et BRCA1, afin de coordonner les points de contrôle du cycle cellulaire, le choix des voies de réparation de l’ADN, le remodelage de la chromatine et l’apoptose. Dans les systèmes murins, Atm est largement utilisé pour étudier les réseaux de stabilité du génome qui influencent le développement, la diversification immunitaire et l’intégrité neuronale. L’altération ou la fonction hypomorphe d’ATM perturbe la réponse aux dommages de l’ADN et est fortement associée à une susceptibilité accrue au cancer ainsi qu’à des phénotypes neurodégénératifs dans des modèles de maladie.
Atm Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Atm dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Atm. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Atm. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Atm.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.