ATF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416821

Übersicht

ATF5 kodiert den aktivierenden Transkriptionsfaktor 5 (ATF-5), einen bZIP-Transkriptionsfaktor, der die zelluläre Anpassung an Stress koordiniert, indem er Genexpressionsprogramme reguliert, die an Überleben, Proteostase und Differenzierung beteiligt sind. Die Aktivität von ATF-5 wird häufig mit der Signalübertragung der integrierten Stressantwort und der transkriptionellen Kontrolle nachgeschaltet eIF2α-/ATF4-abhängiger Signalwege in Verbindung gebracht, wobei seine Rollen in der Mitochondrienfunktion und der Apoptose kontextabhängig sind. In proliferierenden Zellen wird ATF-5 eine Rolle bei der Aufrechterhaltung des Linienzustands sowie bei der Unterstützung von Zellzyklus- und metabolischer Umprogrammierung unter ungünstigen Bedingungen zugeschrieben. Eine dysregulierte ATF5-Expression wurde in mehreren Krebsmodellen und anderen stressassoziierten Pathologien beschrieben, was ATF5 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen von Stresssignalwegen und transkriptionellen Netzwerken macht.

Das ATF-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATF5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATF5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATF5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATF-5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATF5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATF-5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ATF5-Exone abzielen, die für die ATF-5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATF5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATF-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ATF-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATF5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATF-5 HDR-Plasmid (h) und ATF-5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATF5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATF5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.