ASXL1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401252-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ASXL1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ASXL1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ASXL1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ASXL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ASXL1: sc-293204
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ASXL1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401252-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASXL1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401252-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASXL1 kodiert ein Additional-Sex-Combs-like-Protein, das als epigenetischer Regulator wirkt und über Interaktionen mit Polycomb-/Trithorax-assoziierten Komplexen Chromatinzustände und Transkriptionsprogramme koordiniert. Durch die Modulation von Histonmodifikationen und der Chromatinzugänglichkeit beeinflusst ASXL1 die Festlegung von Zelllinien, die Differenzierung und die Aufrechterhaltung der Zellidentität, mit nachgelagerten Effekten auf Genexpressionsnetzwerke, die Proliferation und Entwicklung steuern. Eine Störung von ASXL1 beeinträchtigt die Chromatinregulation und die Genauigkeit der Transkription und macht es zu einem zentralen Knoten in Signalwegen, die mit der hämatopoetischen Homöostase und der Entwicklungskontrolle verknüpft sind. Wiederkehrende Veränderungen in ASXL1 werden häufig bei myeloischen Malignomen und anderen Differenzierungsstörungen untersucht, was seine Relevanz für mechanistische Forschung zur Genomregulation unterstreicht.
ASXL1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ASXL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ASXL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ASXL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ASXL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.