ASPP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404330-LAC

PPP1R13B codifica la proteina 1 stimolatrice dell’apoptosi di p53 (ASPP1), un regolatore della trascrizione responsiva allo stress che potenzia il programma trascrizionale pro-apoptotico di TP53 e dei membri correlati della famiglia. ASPP1 partecipa alla risposta al danno al DNA, al controllo dei checkpoint del ciclo cellulare e all’apoptosi modulando output trascrizionali selettivi a livello di promotore, collegando la segnalazione associata alla cromatina alle decisioni sul destino cellulare. Un’alterata espressione di PPP1R13B o una deregolazione dell’attività dell’asse ASPP1–p53 è stata associata alla tumorigenesi e alla resistenza allo stress genotossico in diversi contesti oncologici, rendendola rilevante per studi sulla segnalazione oncogenica, la stabilità del genoma e le soglie apoptotiche. Queste funzioni collocano ASPP1 come un nodo utile per analizzare come i co-regolatori trascrizionali modulino l’attività della via di p53 nei diversi tipi cellulari.

Le particelle di attivazione lentivirale ASPP1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PPP1R13B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ASPP1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PPP1R13B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ASPP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PPP1R13B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.