Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ASC/TMS1/PYCARD Double Nickase Plasmid (h): sc-400151-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ASC/TMS1/PYCARD Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ASC/TMS1/PYCARD Double-Nickase-Plasmid (h) und ASC/TMS1/PYCARD Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PYCARD abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ASC/TMS1/PYCARD: sc-514414
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ASC/TMS1/PYCARD Double Nickase Plasmid (h) | sc-400151-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASC/TMS1/PYCARD Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400151-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PYCARD, auch bekannt als ASC/TMS1, kodiert ein Adapterprotein, das die Assemblierung des Inflammasoms initiiert, indem es über seine PYD- und CARD-Domänen Sensorproteine wie NLRP3 und AIM2 mit CASP1 verbindet. Diese Gerüstfunktion ermöglicht eine durch räumliche Nähe ausgelöste Aktivierung von Caspase‑1, was zur Spaltung von Pro‑IL‑1β und Pro‑IL‑18 sowie zur Induktion pyroptotischen Zelltods über Gasdermin D führt und ASC in das Zentrum der angeborenen Immun- und Stressantwort-Signalgebung rückt. In menschlichen Zellen ist PYCARD an der Pathogenerkennung, steriler Entzündung und Zelltod-Signalwegen beteiligt, die die Immunantworten von Makrophagen und Epithelzellen prägen. Eine fehlregulierte PYCARD/Asc-Signalgebung wird mit chronisch-entzündlichen Erkrankungen, Neuroinflammation, Stoffwechselerkrankungen und tumorassoziierter Entzündung in Verbindung gebracht und ist daher ein häufiges Ziel mechanistischer Studien zur Zytokinreifung und Inflammasomdynamik.
ASC/TMS1/PYCARD Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PYCARD-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PYCARD abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PYCARD-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PYCARD-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.