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ARRDC1双切口酶质粒(h) | sc-407858-NIC | 20 µg | $410.00 |
含有 arrestin 结构域的蛋白 1(ARRDC1)是一种与质膜相关的衔接蛋白,参与内体运输以及依赖泛素的膜蛋白周转调控。ARRDC1 可招募 NEDD4 家族 E3 泛素连接酶以促进货物蛋白泛素化,并参与 ARRDC1 介导的微囊泡生成,从而与细胞外囊泡生物发生及细胞间通讯相联系。通过这些功能,ARRDC1 影响受体信号传导的动态过程,包括依赖膜受体内吞与回收的通路。围绕 ARRDC1 的囊泡运输与泛素信号失调已在癌细胞信号传导和病毒出芽等情境中被研究,因此其与膜重塑机制研究密切相关。
ARRDC1 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 ARRDC1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ARRDC1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏ARRDC1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了ARRDC1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。