Arnt 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419204-ACT

Arnt (translocador nuclear do receptor de hidrocarbonetos aromáticos), também conhecido como ARNT1/HIF-1β, codifica um fator de transcrição bHLH-PAS que forma heterodímeros com parceiros como AHR e HIF-1α para coordenar programas gênicos de resposta a xenobióticos e de sensoriamento de oxigênio. Em células de camundongo, o ARNT integra sinais ambientais e metabólicos para regular redes transcricionais que controlam a sinalização angiogênica, o metabolismo glicolítico, a adaptação mitocondrial e a diferenciação celular. Por meio do eixo AHR/ARNT, ele modula vias de desintoxicação (incluindo a indução do citocromo P450), enquanto, na via do HIF, sustenta a regulação transcricional responsiva à hipóxia. A desregulação da sinalização dependente de ARNT é amplamente utilizada como um ponto de entrada mecanístico para estudar inflamação, remodelamento vascular e adaptação hipóxica associada a tumores em modelos pré-clínicos, sem implicar desfechos clínicos.

Arnt 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Arnt sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Arnt 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Arnt em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Arnt, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Arnt 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Arnt nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Arnt 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Arnt 1 em células tumorais com expressão de Arnt silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.