ARK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423198

Übersicht

Aurka kodiert die Serin/Threonin-Kinase ARK-1 (Aurora-Kinase A), einen zentralen Regulator der Zentrosomenreifung, des Eintritts in die Mitose und des Aufbaus eines bipolaren Spindelapparats in Mauszellen. ARK-1 koordiniert Phosphorylierungsereignisse, die die Mikrotubuli-Dynamik und die Chromosomensegregation unterstützen, und wirkt dabei in Netzwerken der Zellzykluskontrolle, zu denen die PLK1- und CDK1-abhängige Mitoseprogression sowie die Checkpoint-Überwachung gehören. Eine dysregulierte Aurka-Aktivität beeinträchtigt die genomische Stabilität und wurde mit abnormen Proliferationsphänotypen in Verbindung gebracht, die für onkogene Transformation und Aneuploidie relevant sind. Daher wird Aurka häufig als mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um mitotische Treue, Defekte im Spindelaufbau und zellzyklusgekoppelte Stressantworten zu untersuchen.

Das ARK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aurka-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aurka-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aurka nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ARK-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aurka-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ARK-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aurka-Exone abzielen, die für die ARK-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aurka-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ARK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ARK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aurka-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ARK-1 HDR-Plasmid (m) und ARK-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aurka-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aurka-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.