Aquaporin 5/AQP5 Double Nickase Plasmid (h): sc-400567-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Aquaporin 5/AQP5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Aquaporin 5/AQP5 Double-Nickase-Plasmid (h) und Aquaporin 5/AQP5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AQP5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aquaporin 5/AQP5: sc-514022
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aquaporin 5/AQP5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400567-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aquaporin 5/AQP5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400567-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AQP5 kodiert Aquaporin 5, einen membranständigen Wasserkanal, der einen schnellen, osmotisch getriebenen Wassertransport über die Membranen epithelialer und drüsiger Zellen ermöglicht. Beim Menschen trägt AQP5 zur Flüssigkeitssekretion und zur Kontrolle der Hydratation in Speichel- und Tränendrüsen sowie in den Epithelien der Atemwege und Alveolen bei und beeinflusst damit die Physiologie der epithelialen Barriere und die Homöostase der Flüssigkeitsschicht auf Schleimhäuten. Seine Regulation ist mit Signalprozessen verknüpft, die Membrantrafficking und osmotisches Gleichgewicht modulieren, darunter calcium- und cAMP-assoziierte Signalwege, die die Lokalisation des Kanals und die Dynamik des epithelialen Transports beeinflussen. Eine veränderte AQP5-Expression oder -Lokalisation wurde in der Literatur mit gestörter Sekretionsfunktion und einem epithelialen Flüssigkeitsungleichgewicht in Verbindung gebracht, was für entzündliche Erkrankungen der Atemwege, Drüsenfunktionsstörungen sowie tumorassoziierte Veränderungen der Zellmigration und Gewebehydratation relevant ist.
Aquaporin 5/AQP5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AQP5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AQP5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AQP5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AQP5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.