Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419176
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Aquaporin 5/AQP5 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Aquaporin 5/AQP5-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aquaporin 5/AQP5: sc-514022
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419176 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Aqp5 kodiert Aquaporin 5 (AQP5), einen membranständigen Wasserkanal, der in sekretorischen Geweben wie Speichel- und Tränendrüsen sowie in den Atemwegen einen schnellen, osmotisch getriebenen Wassertransport über epitheliale Barrieren ermöglicht. Durch die Regulation des transepithelialen Flüssigkeitstransports und die Mitwirkung an der Homöostase des Zellvolumens beeinflusst AQP5 Prozesse wie die Hydratation der Atemwegsoberfläche, die Drüsensekretion und die Barrierefunktion. Eine veränderte Expression oder Lokalisation von AQP5 wurde mit einer gestörten Flüssigkeitshomöostase und epithelialem Remodeling bei entzündlichen Atemwegserkrankungen, exokriner Drüsendysfunktion und ödemassoziierten Gewebereaktionen in Verbindung gebracht. In Mausmodellen wird Aqp5 häufig im Kontext der epithelialen Differenzierung, der Kopplung von Ionen- und Wassertransport sowie stressresponsiver Signalwege untersucht, die die Physiologie der Schleimhäute prägen.
Das Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aqp5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aqp5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aqp5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aquaporin 5/AQP5-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aqp5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aquaporin 5/AQP5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Aqp5-Exone abzielen, die für die Aquaporin 5/AQP5-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aqp5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aqp5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aquaporin 5/AQP5 HDR-Plasmid (m) und Aquaporin 5/AQP5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aqp5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aqp5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.