Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400567

Übersicht

AQP5 kodiert Aquaporin 5, einen membranständigen Wasserkanal, der einen schnellen, selektiven Wassertransport über die Plasmamembran in epithelialen Geweben ermöglicht. In sekretorischen Epithelien der Atemwege, der Speichel- und Tränendrüsen sowie in den Lungenalveolen unterstützt AQP5 die Flüssigkeitshomöostase und trägt durch die Regulation des transepithelialen Wasserflusses zur Hydratation der Schleimhäute und zur Barrierephysiologie bei. Seine Aktivität ist in osmotische Stressantworten, epithelialen Ionentransport und die Organisation von Zellkontakten eingebunden, die zusammen die Flüssigkeitsschicht an der Atemwegsoberfläche und die Drüsensekretion prägen. Eine fehlregulierte AQP5-Expression oder -Lokalisation wurde mit epithelialer Dysfunktion bei entzündlichen Atemwegserkrankungen, einer Hypofunktion der Speicheldrüsen und einer veränderten Wasserhandhabung in der pulmonalen Pathophysiologie in Verbindung gebracht, wodurch AQP5 für mechanistische Studien zur Sekretion und zum epithelialen Remodeling relevant ist.

Das Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AQP5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AQP5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AQP5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aquaporin 5/AQP5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AQP5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aquaporin 5/AQP5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AQP5-Exone abzielen, die für die Aquaporin 5/AQP5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AQP5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AQP5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aquaporin 5/AQP5 HDR-Plasmid (h) und Aquaporin 5/AQP5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AQP5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AQP5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.