Aquaporin 5/AQP5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400567-ACT

AQP5 kodiert Aquaporin 5, einen membranständigen Wasserkanal, der einen schnellen, osmotisch getriebenen Wassertransport über die Plasmamembran in sekretorischen Epithelien ermöglicht. Er unterstützt die Flüssigkeitshomöostase und Sekretion in Geweben wie Speichel- und Tränendrüsen sowie in den Atemwegen und trägt zur Epithelbarrierefunktion und zur Regulation der Hydratation der Schleimhaut bei. Lokalisation und Menge von AQP5 werden dynamisch durch Signalwege reguliert, die Membrantransport und die phosphorylierungsabhängige Verfügbarkeit des Kanals steuern, wodurch AQP5 mit Ionen- und Wasserbewegungen während der Drüsensekretion verknüpft ist. Eine dysregulierte AQP5-Expression wurde mit einem veränderten Gleichgewicht der Flüssigkeitsschicht auf der Atemwegsoberfläche, entzündlichem epithelialem Remodeling und Drüsenfunktionsstörungen in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien in der respiratorischen und exokrinen Biologie motiviert.

Aquaporin 5/AQP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AQP5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Aquaporin 5/AQP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AQP5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AQP5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Aquaporin 5/AQP5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AQP5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Aquaporin 5/AQP5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Aquaporin 5/AQP5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AQP5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.