Plásmido CRISPR de Activación (h) ApoER2: sc-403253-ACT

LRP8 codifica el receptor 2 de apolipoproteína E (ApoER2), un miembro de la familia de receptores de LDL que media la endocitosis y la transducción de señales en neuronas y células vasculares. ApoER2 funciona como receptor de Reelin y de lipoproteínas que contienen ApoE, favoreciendo la migración neuronal, la plasticidad sináptica y la remodelación del citoesqueleto mediante señalización downstream dependiente de Dab1 y el crosstalk con las vías PI3K/AKT y de quinasas de la familia Src. En el sistema nervioso central, LRP8 influye en el tráfico de receptores glutamatérgicos y en la potenciación a largo plazo, vinculando su regulación con los mecanismos de aprendizaje y memoria. La señalización de ApoER2 desregulada y el equilibrio de isoformas se han asociado a fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, y LRP8 también se estudia por su papel en el manejo de lípidos y en la biología plaquetaria relevante para la patología vascular.

ApoER2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LRP8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ApoER2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LRP8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LRP8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ApoER2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LRP8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ApoER2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ApoER2 en células tumorales con expresión de LRP8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.