Plasmide CRISPR d'Activation (m) APLNR: sc-423839-ACT

Le gène murin **Aplnr** code le récepteur de l’apéline (APLNR), un RCPG de classe A qui se lie aux peptides apéline ainsi qu’à ELABELA/Toddler afin de réguler une signalisation dépendante des protéines G, notamment la modulation de l’AMPc, les flux intracellulaires de Ca2+, et les voies PI3K–AKT et MAPK/ERK. L’activité d’APLNR influence la fonction endothéliale et celle des cellules musculaires lisses vasculaires, les réponses angiogéniques, le développement et le remodelage cardiaques, ainsi que l’homéostasie hydrique, via un contrôle intégré de la migration, de la prolifération et des propriétés de barrière. Dans les systèmes nerveux et métabolique, la signalisation APLNR a été associée au couplage neurovasculaire et à l’équilibre énergétique, positionnant **Aplnr** comme un nœud mécanistique reliant les programmes de développement et l’adaptation au stress. Une activité dérégulée de la voie APLNR est associée à des phénotypes cardiométaboliques, à des dysfonctions vasculaires et à l’angiogenèse associée aux tumeurs, ce qui la rend pertinente pour la cartographie des voies dans des modèles de maladie.

APLNR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Aplnr sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

APLNR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Aplnr dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Aplnr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de APLNR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Aplnr natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de APLNR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie APLNR dans les cellules tumorales présentant une expression de Aplnr silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.