Apelin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401548

Übersicht

APLN kodiert Apelin, einen sezernierten Peptidliganden des APJ‑Rezeptors (APLNR), der die kardiovaskuläre Homöostase, Angiogenese, den Flüssigkeitshaushalt und die metabolische Signalübertragung reguliert. Die Bindung von Apelin an APJ aktiviert GPCR‑vermittelte Signalwege, darunter PI3K/AKT, ERK/MAPK und AMPK, und beeinflusst dadurch die Migration von Endothelzellen, den Gefäßtonus und die zelluläre Energienutzung. In menschlichen Geweben reagiert die Apelin-Expression auf Hypoxie und entzündliche Signale und wird häufig im Zusammenhang mit Gefäßumbau und der Biologie des Fettgewebes untersucht. Eine Dysregulation der APLN‑Signalgebung wurde mit kardiometabolischen Phänotypen, pulmonaler und systemischer Gefäßdysfunktion sowie Prozessen im Tumormikromilieu wie der Neovaskularisation in Verbindung gebracht.

Das Apelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des APLN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des APLN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von APLN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Apelin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von APLN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Apelin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf APLN-Exone abzielen, die für die Apelin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere APLN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Apelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Apelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des APLN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Apelin HDR-Plasmid (h) und Apelin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von APLN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten APLN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.