AP-3β Lentiviral Activation Particles (m): sc-419135-LAC

Ap3b1 kodiert die β1‑Untereinheit des Adaptorprotein‑3‑(AP‑3)-Komplexes, eines zentralen Coat-Adaptors, der die Auswahl von Fracht und den Transport vom trans‑Golgi‑Netzwerk sowie aus endosomalen Kompartimenten zu Lysosomen und lysosomenverwandten Organellen vermittelt. AP‑3β unterstützt die Sortierung von Membranproteinen, die an der Vesikelbiogenese, der Organellenreifung und der regulierten Sekretion beteiligt sind, und beeinflusst damit Signalwege wie den endolysosomalen Transport und den synaptischen Vesikelkreislauf in spezialisierten Zellen. Eine Störung der AP‑3‑Komplexfunktion beeinträchtigt den vesikulären Transport und wurde in Modellsystemen mit Pigmentierungsdefekten, neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderter Granulafunktion von Immunzellen in Verbindung gebracht. Daher wird Ap3b1 häufig zur Erforschung von Mechanismen des intrazellulären Transports, der Organellenidentität und des zelltypspezifischen Frachtroutings untersucht.

AP-3β Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ap3b1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

AP-3β Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ap3b1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen AP-3β-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ap3b1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.