Plásmido Doble Nickase (h) ANO1: sc-401314-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ANO1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ANO1 (h) y el plásmido de doble nickasa ANO1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ANO1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ANO1 Anticuerpo (C-5): sc-377115
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ANO1 | sc-401314-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ANO1 | sc-401314-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANO1 (también conocido como TMEM16A) codifica un canal de cloruro activado por calcio que regula la secreción de fluidos epiteliales, la excitabilidad de la membrana y el tono del músculo liso al acoplar las señales intracelulares de Ca²⁺ al flujo de aniones. La actividad de ANO1 modula el transporte transepitelial, contribuye a la señalización sensorial y neuronal, y se relaciona con vías dependientes de calcio que influyen en la regulación del volumen celular y el potencial de membrana. Las alteraciones en la expresión o la función de ANO1 se han vinculado con trastornos de la secreción epitelial y de la fisiología de las vías respiratorias, y con frecuencia se estudia en el contexto de la biología tumoral, donde la remodelación de los canales iónicos puede afectar la proliferación, la migración y el microambiente tumoral. Estas características hacen de ANO1 una diana útil para analizar la señalización dependiente de canales de cloruro y los procesos fisiológicos impulsados por el calcio en células humanas.
ANO1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ANO1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ANO1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ANO1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ANO1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.