Plasmide Double Nickase (h) Annexin I: sc-401024-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Annexin I correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Annexin I Double Nickase (h) et le plasmide Annexin I Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ANXA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Annexin I Antibody (EH17a): sc-12740
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Annexin I | sc-401024-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Annexin I | sc-401024-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ANXA1 humain code l’annexine I, une protéine de liaison aux phospholipides dépendante du Ca²⁺, qui régule la dynamique membranaire, le remodelage du cytosquelette et le trafic vésiculaire lors de l’activation cellulaire et des réponses au stress. L’annexine I participe aux signalisations inflammatoires et pro-résolutives via des interactions avec les récepteurs des peptides formylés et par la modulation de voies des eicosanoïdes dépendantes de la phospholipase A2, reliant la signalisation calcique à la production de médiateurs lipidiques. Elle influence l’apoptose, l’efferocytose et la migration cellulaire, et a été impliquée dans la fonction de barrière endothéliale ainsi que dans l’extravasation des cellules immunitaires. Une expression ou une localisation dérégulée d’ANXA1 est associée à une modification du tonus inflammatoire et a été rapportée dans de multiples types de tumeurs, où elle corrèle avec des changements de l’invasion, des phénotypes associés aux métastases et des voies de réponse aux traitements.
Annexin I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANXA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANXA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANXA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANXA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.