Annexin ICRISPR激活质粒(h): sc-401024-ACT

人类 ANXA1 基因编码 annexin I（膜联蛋白 I），这是一种 Ca²⁺ 依赖性的磷脂结合蛋白，可与细胞膜相关联，从而调控囊泡运输、细胞骨架重塑以及膜修复。膜联蛋白 I 是炎症消退与先天免疫信号传导的重要介质，可影响磷脂酶 A2 活性与类花生酸（eicosanoid）生成，并调节白细胞迁移和凋亡细胞清除（efferocytosis）。它也与细胞增殖、凋亡以及上皮—间质动态变化相关的通路有关，并在应激反应中呈现依赖具体情境的作用。已有研究报道 ANXA1 表达失调见于多种炎症性疾病及多种癌症类型；在这些背景下，它被用于研究其作为肿瘤微环境信号与转移表型调控因子的作用。

Annexin I CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ANXA1的表达。

Annexin I CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ANXA1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ANXA1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Annexin I表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ANXA1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Annexin I的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ANXA1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Annexin I通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。