ANKRD22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424577

Übersicht

Ankrd22 kodiert ANKRD22, ein Ankyrin-Repeat-haltiges Protein, das an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt ist und dadurch zelluläre Signalwege sowie stressadaptive Programme beeinflussen kann. Expressionsprofilierungsstudien haben ANKRD22 mit dem Stoffwechselzustand und einer gewebespezifischen Regulation in Verbindung gebracht, was auf Funktionen in Signalwegen hindeutet, die die Energiebilanz mit Wachstums- und Überlebenssignalen koordinieren. In Säugersystemen sind Ankyrin-Repeat-Proteine häufig mit ubiquitinabhängigem Proteinabbau, zytoskelettaler Organisation und transkriptioneller Kontrolle verknüpft, wodurch Ankrd22 für die Analyse kontextabhängiger regulatorischer Netzwerke relevant ist. Eine veränderte ANKRD22-Expression wurde in krankheitsassoziierten Datensätzen beschrieben, was ihren Einsatz als molekularen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu entgleistem Stoffwechsel und proliferativer Signalgebung in vivo und in Zellmodellen unterstützt.

Das ANKRD22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ankrd22-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ankrd22-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ankrd22 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ANKRD22-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ankrd22-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ANKRD22-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ankrd22-Exone abzielen, die für die ANKRD22-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ankrd22-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ANKRD22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ANKRD22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ankrd22-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ANKRD22 HDR-Plasmid (m) und ANKRD22 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ankrd22-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ankrd22-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.