Androgen Receptor CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400026-ACT

AR kodiert den humanen Androgenrezeptor, einen ligandenaktivierten nukleären Hormonrezeptor, der Androgene bindet, in den Zellkern transloziert und die Transkription über Androgen-Response-Elemente reguliert. Die Signalübertragung des Androgenrezeptors koordiniert über Interaktionen mit Koregulatoren sowie Crosstalk mit den PI3K/AKT-, MAPK- und WNT-Signalwegen den Zellzyklusfortschritt, Differenzierungsprogramme, den Stoffwechsel und das Chromatin-Remodeling. Eine fehlregulierte AR-Aktivität ist mit endokrin gesteuerter Biologie verknüpft und wird häufig bei hormonresponsiven Krebserkrankungen, neuromuskulären Phänotypen wie der spinalen und bulbären Muskelatrophie sowie Störungen des Steroidstoffwechsels untersucht. Als transkriptioneller Knotenpunkt liefert AR ein gut zugängliches Readout zur Untersuchung der Enhancer-Nutzung, des epigenetischen Zustands und stimulusabhängiger Gennetzwerke.

Androgen Receptor Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Androgen Receptor Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Androgen Receptor-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Androgen Receptor-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Androgen Receptor-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.