Amylase 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419103

Übersicht

Das murine Amy1 kodiert Amylase 1, eine sekretierte Glykosidhydrolase, die die Endohydrolyse von α-1,4-glykosidischen Bindungen in Stärke und Glykogen katalysiert und dabei Maltose und Oligosaccharide erzeugt. Indem AMY1 die frühesten Schritte der Kohlenhydratverdauung steuert, beeinflusst es die luminale Glukoseverfügbarkeit und nachgeschaltete metabolische Signalwege, einschließlich nährstoffsensitiver Signalwege, die die epitheliale und mikrobielle Ökologie prägen. Unterschiede in der Amylaseaktivität wurden mit der Verarbeitung von Nahrungskohlenhydraten in Verbindung gebracht und im Kontext metabolischer Phänotypen wie Adipositas und Insulinresistenz untersucht, was ihre Relevanz für Wechselwirkungen zwischen Ernährung und Stoffwechsel unterstreicht. In der Maus stellt Amy1 ein gut handhabbares Modell dar, um die Regulation von Verdauungsenzymen, die Biologie sekretierter Proteine und Gen–Diät-Effekte auf die systemische Physiologie zu untersuchen.

Das Amylase 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Amy1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Amy1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Amy1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Amylase 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Amy1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Amylase 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Amy1-Exone abzielen, die für die Amylase 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Amy1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Amylase 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Amylase 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Amy1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Amylase 1 HDR-Plasmid (m) und Amylase 1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Amy1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Amy1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.