Particules Lentivirales d'Activation (h) AMPKβ1: sc-402952-LAC

PRKAB1 code la sous-unité régulatrice β1 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un capteur central de l’état énergétique qui intègre le rapport AMP/ATP cellulaire afin de coordonner l’homéostasie métabolique. AMPKβ1 contribue à l’assemblage de l’hétérotrimère, à la localisation sous-cellulaire et à la liaison au glycogène, influençant ainsi le contrôle en aval de la captation du glucose, de l’oxydation des acides gras, de l’autophagie et de l’inhibition des signaux anaboliques via des voies telles que mTORC1. Par ces fonctions, AMPKβ1 aide à coupler la disponibilité en nutriments et les réponses au stress à des programmes transcriptionnels et post-traductionnels qui préservent l’équilibre énergétique. La dérégulation de la signalisation AMPK et des complexes associés à PRKAB1 est pertinente pour les recherches sur le remodelage métabolique dans le cancer, la résistance à l’insuline et d’autres troubles liés à une altération de la fonction mitochondriale et de la détection des nutriments.

Les particules d'activation lentivirales AMPKβ1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRKAB1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales AMPKβ1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRKAB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de AMPKβ1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRKAB1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.