Particules Lentivirales d'Activation (h) AMPK alpha 2: sc-400277-LAC

PRKAA2 code la sous-unité catalytique α2 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un capteur énergétique central qui coordonne l’adaptation cellulaire aux stress nutritionnels et énergétiques. AMPKα2 intègre les signaux liés au rapport AMP/ADP sur ATP afin de réguler des voies métaboliques incluant l’oxydation des acides gras, la captation du glucose, la biogenèse mitochondriale, ainsi que l’inhibition des programmes anaboliques via mTORC1 et des effecteurs associés. Dans les cellules humaines, l’activité d’AMPKα2 influence l’autophagie, l’homéostasie redox et le contrôle du cycle cellulaire, reliant PRKAA2 à des recherches sur le syndrome métabolique, le diabète de type 2, le remodelage cardiovasculaire et la reprogrammation métabolique associée au cancer. Ses rôles sélectifs selon les isoformes soutiennent également des études sur l’équilibre énergétique spécifique des tissus, la dynamique mitochondriale et la signalisation de la réponse au stress.

Les particules d'activation lentivirales AMPK alpha 2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRKAA2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales AMPK alpha 2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRKAA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de AMPK alpha 2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRKAA2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.