Plásmido Doble Nickase (h) Ameloblastin: sc-403086-NIC

AMBN codifica la ameloblastina, una proteína secretada de la matriz del esmalte expresada por los ameloblastos que contribuye a la formación del esmalte al regular la organización de la matriz extracelular, el depósito mineral y la adhesión en la interfaz ameloblasto–matriz. La ameloblastina participa en programas del desarrollo que coordinan la polaridad celular epitelial, la diferenciación y la remodelación de la matriz durante la morfogénesis dental, y sus productos de procesamiento pueden influir en la señalización célula–matriz. La alteración de la función de AMBN se asocia con defectos del esmalte y cambios en el comportamiento de los ameloblastos, y la desregulación de AMBN se utiliza como marcador en estudios de diferenciación odontogénica y patologías relacionadas. Estas características hacen de AMBN un locus útil para investigar la biología de la matriz extracelular, los procesos de mineralización y las interacciones epitelio–mesénquima en investigación craneofacial.

Ameloblastin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AMBN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AMBN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AMBN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AMBN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.