ALPPL2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401492-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ALPPL2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ALPPL2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ALPPL2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ALPPL2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ALPPL2: sc-134255
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ALPPL2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401492-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALPPL2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401492-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALPPL2 (alkalische Phosphatase, plazentaähnlich 2) kodiert ein über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes Ectoenzym aus der Familie der alkalischen Phosphatasen, das extrazelluläre Phosphat-Monoester hydrolysiert und die lokale Phosphatverfügbarkeit beeinflussen kann. Als Zelloberflächenprotein ist ALPPL2 in der Lage, den perizellulären Nukleotid-/Phosphatstoffwechsel, die Signalübertragung in Membran-Mikrodomänen sowie differenzierungsassoziierte Prozesse zu modulieren. Seine Expression wird in epithelialen Kontexten häufig als Linien- oder tumorassoziierter Marker untersucht, wobei veränderte Aktivität alkalischer Phosphatasen und die Präsentation von Zelloberflächenantigenen mit Änderungen der Proliferation und des zellulären Zustands einhergehen können. Diese Eigenschaften machen ALPPL2 relevant für mechanistische Studien zur Zellidentität, zur Funktion membranständiger Enzyme und zu krankheitsassoziierten Expressionsprogrammen.
ALPPL2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ALPPL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ALPPL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ALPPL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ALPPL2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.