Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401340-ACT

Das humane Gen **ALDH1A2** kodiert die Aldehyddehydrogenase 1-A2, eine zytosolische Retinaldehyddehydrogenase, die die Oxidation von Retinaldehyd zu Retinsäure katalysiert – einem zentralen Morphogen, das über Retinsäurerezeptoren Transkriptionsprogramme steuert. Durch die Regulation des Retinoidstoffwechsels und der retinsäureabhängigen Genexpression beeinflusst ALDH1A2 die embryonale Musterbildung, die epitheliale Differenzierung und die Gewebehomöostase und greift in entwicklungsbiologische Signalnetzwerke wie die HOX-Genregulation ein. Veränderte ALDH1A2-Aktivität oder -Expression kann Retinsäuregradienten stören und wurde mit angeborenen Fehlbildungen sowie kontextabhängigen Veränderungen des Differenzierungszustands in Verbindung gebracht, die für die Biologie von Krebs und fibrotischen Erkrankungen relevant sind. Da die Retinsäuresignalisierung den metabolischen Zustand mit der transkriptionellen Kontrolle verknüpft, dient ALDH1A2 als nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung von Signalweg-Crosstalk und Zellschicksalsentscheidungen.

Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ALDH1A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ALDH1A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ALDH1A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ALDH1A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ALDH1A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.