Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401340-ACT

O ALDH1A2 humano codifica a aldeído desidrogenase 1-A2, uma desidrogenase citosólica de retinaldeído que catalisa a oxidação do retinaldeído a ácido retinoico, um morfógeno-chave que controla programas transcricionais por meio de receptores de ácido retinoico. Por regular o metabolismo de retinoides e a expressão gênica dependente de ácido retinoico (AR), o ALDH1A2 influencia o padrão embrionário, a diferenciaação epitelial e a homeostase tecidual, além de se integrar a redes de sinalização do desenvolvimento, como a regulação de genes HOX. Alterações na atividade ou na expressão de ALDH1A2 podem perturbar gradientes de ácido retinoico e têm sido associadas a malformações congênitas e a mudanças dependentes do contexto no estado de diferenciação, relevantes para a biologia do câncer e de doenças fibróticas. Como a sinalização por ácido retinoico integra o estado metabólico ao controle transcricional, o ALDH1A2 funciona como um nó útil para dissecar a comunicação entre vias (crosstalk) e as decisões de destino celular.

Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ALDH1A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ALDH1A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ALDH1A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ALDH1A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Aldehyde dehydrogenase 1-A2/ALDH1A2 em células tumorais com expressão de ALDH1A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.