Plásmido CRISPR de Activación (h) Akt3: sc-400028-ACT

AKT3 codifica la cinasa de serina/treonina Akt3, un efector dependiente de PI3K que integra señales de factores de crecimiento y nutrientes para regular la supervivencia celular, el metabolismo, la proliferación y la diferenciación. Akt3 participa en la señalización canónica PI3K–AKT–mTOR e interactúa con redes mediadas por FOXO, GSK3 y BAD, que determinan la resistencia a la apoptosis, la síntesis de proteínas y la progresión del ciclo celular. En tejidos humanos, la actividad de AKT3 es especialmente relevante para el desarrollo neural y las respuestas al estrés celular, y la señalización desregulada se ha asociado con alteraciones del control del crecimiento y con la remodelación de vías oncogénicas en múltiples contextos de enfermedad. Por ello, modular la expresión de AKT3 es útil para analizar la dinámica de la vía, la regulación por retroalimentación y las transiciones de estado celular vinculadas a fenotipos proliferativos y metabólicos.

Akt3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AKT3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Akt3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AKT3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AKT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Akt3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AKT3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Akt3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Akt3 en células tumorales con expresión de AKT3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.