Akt2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400060-ACT

AKT2 kodiert die Serin/Threonin-Kinase Akt2, einen zentralen Effektor der PI3K-abhängigen Signalübertragung, der die Stimulation durch Wachstumsfaktoren mit zellulärem Stoffwechsel, Überleben und Proliferation verknüpft. Akt2 phosphoryliert Substrate, die Glukoseaufnahme, Glykogensynthese, Lipidstoffwechsel und Zellzyklusprogression regulieren, und spielt eine wichtige Rolle in der Insulinsignalkaskade sowie in der Kontrolle des mTOR-Signalwegs. In der Humanbiologie wird eine veränderte AKT2-Aktivität mit einer gestörten metabolischen Homöostase und onkogenen Signalkreisläufen in Verbindung gebracht, die Zellwachstum und Stressresistenz prägen. Als Knotenpunkt, der Inputs von Rezeptor-Tyrosinkinasen mit nachgeschalteten transkriptionellen und metabolischen Programmen integriert, wird AKT2 breit in Modellen der Insulinresistenz, der Adipozytenbiologie und der Tumorzellsignalgebung untersucht.

Akt2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AKT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Akt2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AKT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AKT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Akt2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AKT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Akt2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Akt2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AKT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.