AKAP 7 Double Nickase Plasmid (h): sc-406308-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AKAP 7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AKAP 7 Double-Nickase-Plasmid (h) und AKAP 7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AKAP7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AKAP 7: sc-517021
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AKAP 7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406308-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AKAP 7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406308-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKAP7 kodiert das A‑Kinase‑Ankerprotein 7, ein Gerüstprotein, das die cAMP‑abhängige Signalübertragung der Proteinkinase A (PKA) räumlich begrenzt, indem es PKA an definierte subzelluläre Kompartimente bindet. Durch die Organisation lokaler Signal‑Mikrodomänen trägt AKAP7 zur zeitlichen Abstimmung und Spezifität von Phosphorylierungsereignissen bei, die die Regulation von Ionenkanälen, den Calciumhaushalt und die breitere Wechselwirkung von Second‑Messenger‑Signalwegen beeinflussen. Diese Kompartimentierung verknüpft AKAP7 mit Prozessen wie der Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung, signalabhängiger Membrandynamik und phosphorylierungsgesteuerten Transkriptionsantworten. Eine Fehlregulation der AKAP‑PKA‑Verankerung wurde mit veränderten zellulären Signalzuständen in Verbindung gebracht, die für kardiometabolische und neurophysiologische Phänotypen relevant sind, was seinen Einsatz als Zielstruktur für mechanistische Untersuchungen der Signaltreue unterstützt.
AKAP 7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AKAP7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AKAP7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AKAP7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AKAP7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.