Plasmide CRISPR/Cas9 KO AKAP 7 (h): sc-406308

Présentation

AKAP7 (A-kinase anchoring protein 7) est une protéine d’ancrage de la PKA (protéine kinase A) qui restreint spatialement la signalisation dépendante de l’AMPc en arrimant la PKA à des microdomaines subcellulaires définis. Grâce à la compartimentation de la PKA et des effecteurs associés, AKAP7 aide à coordonner des événements de phosphorylation qui régulent l’activité des canaux ioniques, l’excitabilité membranaire et des programmes transcriptionnels en aval sensibles à l’AMPc. Cette signalisation ancrée contribue au contrôle fin de dynamiques cellulaires telles que la gestion du calcium et les réponses couplées aux stimuli dans des tissus excitables et non excitables. La dérégulation des réseaux d’échafaudage AMPc/PKA, y compris l’altération de la signalisation dépendante d’AKAP7, est pertinente pour les études mécanistiques de l’électrophysiologie cardiaque, de la signalisation neuronale et, plus largement, de pathologies liées à une compartimentation aberrante des kinases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AKAP 7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AKAP7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AKAP7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AKAP7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AKAP 7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AKAP7 pour l'étude de la signalisation de AKAP 7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AKAP7 essentiels à la fonction de AKAP 7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AKAP7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AKAP 7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AKAP 7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AKAP7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AKAP 7 plasmide HDR (h) et le AKAP 7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AKAP7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AKAP7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.